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背景介绍
吸光度测量提供了关于材料化学成分的宝贵信息。入射到样品上的光可以是透射的,吸收的或散射的。透射是指通过样品的光;遇到分子的光可以被吸收或散射。吸光度可以作为一种定性工具来识别物质,也可以作为一种定量工具来测量溶液中分子的浓度。
吸光度是一项重要技术,特别是在生物医学和生命科学领域,研究人员、开发人员和工艺工程师将吸光度技术应用于从蛋白质分析到护理点诊断的各种挑战。
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吸光度的线性度
光谱仪测量精度的一个指标是其吸光度的线性。这在比尔定律中有所描述,一个在给定波长下吸收光的溶液将在该波长下产生一个吸光峰,其强度随着溶液浓度的变化而线性变化。例如,如果溶液浓度增加一倍,吸光峰的高度也会增加一倍。因此,当我们描述一个光谱仪在2AU(吸光度单位)以下具有吸光度线性时,这表明在2AU以上,样品浓度和吸光度峰值之间的关系会变得非线性,这种非线性与检测器的噪声和杂散光有关。
具有高吸光度线性的光谱仪使用户能够:1)在广泛的浓度水平上准确测量样品;2)不需要繁琐的样品稀释步骤,这些步骤有可能在测量过程中引入误差。这对于需要非常高的测量精度的应用来说是非常关键的,因为你想比较一个实验和另一个实验的结果,或者你只有有限的样品量可以使用。
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使用Ocean ST的蛋白质和DNA的吸光度
为了评估Ocean ST的吸光度线性,我们测量了牛血清白蛋白(BSA)和DNA oligo。BSA是一种常用于生化应用的蛋白质,DNA oligo是合成的DNA或RNA片段,常见于包括基因测试和医疗诊断在内的各种应用。
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设备设置
我们使用Ocean ST-UV(185-650纳米),积分时间设置为3.8毫秒,扫描平均为100次,boxcar设置为3。在测量之前,光谱仪和光源被预热了30分钟,以确保热稳定性。
QP450-1-XSR极端耐晒光纤(数量2)。这些是450微米的SR光纤,带有不锈钢BX护套。
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样品制备和测量
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结果
对BSA的吸光度测量显示了吸光度在2AU以下的线性,超过了我们对Ocean ST的预期(图1)。这具有非常积极的意义,因为BSA是一种典型的蛋白质,在生命科学研究和发展的许多领域都有应用。
图1. Ocean ST微型光谱仪在广泛的蛋白质浓度水平上显示了显著的吸光度线性。
同样,Ocean ST对DNA oligo的测量也取得了令人印象深刻的吸光度线性结果(图2)。这表明Ocean ST对DNA oligo科研用户定制DNA oligo生产企业都有价值,前者是一些分子生物学研究和开发工作的起点,后者则是在制造过程中使用紫外可见光谱作为定量的步骤。
(注:Yvette Mattley博士为本应用说明提供了测量数据。)